Поляризационная микроскопия является одним из мощных методов морфологических исследований структуры и свойств препаратов. Поляризационная микроскопия позволяет изучать свойства гистологических структур, обладающих способностью двойного лучепреломления. Для реализации метода поляризационной микроскопии можно дооснастить любой микроскоп. Микроскоп дооснащается двумя поляризационными фильтрами: первый помещают непосредственно под конденсором, второй помещают между объективом и глазом исследователя. Поворотом поляризатора добиваются затемнения поля зрения. Помещают препарат. Вращают препарат на предметном столике до появления ярко светящихся структур. Свечение появляется в тот момент, когда ось двулучепреломляющего объекта будет находиться под углом 45 град. к плоскости поляризации.
Ранее для поляризационной микроскопии использовались поляризационные фильтры с линейной поляризацией. В новой методике изучалась возможность диагностики препаратов с использованием поляризационных фильтров с циркулярной поляризацией. Оказалось, что изображения, полученные с помощью циркулярных фильтров, несут гораздо больше информации и позволяют выявлять более тонкую структуру тканей и клеток.
Исследования в поляризованном свете можно проводить на замороженных или парафиновых срезах после депарафинизации, неокрашенных и окрашенных, заключенных в различные среды. Блоки ткани следует вырезать и ориентировать таким образом, чтобы мышечные волокна интересующего слоя миокарда были срезаны продольно.
Миофибриллы в поляризованном свете обнаруживают характерную поперечную исчерченность, связанную с чередованием, анизотропных (А) и изотропных (I) дисков. Диски А обладают ярко выраженным положительным двулучепреломлением и кажутся светлыми в поляризованном свете (в обычном свете они темные), тогда как I-диски почти полностью лишены способности к двулучепреломлению и в поляризованном свете выглядят темными (в обычном свете — светлые).
С помощью поляризационной микроскопии удобно выявлять наиболее универсальные повреждения мышечных волокон миокарда и скелетных мышц — контрактурные повреждения (2, 3) (нарушение поперечной исчерченности кардиомиоцитов — одним из ранних признаков повреждения миофибрилл).
Принято выделять 3 стадии этих повреждений:
— I стадия — усиливается анизотропия на отдельных участках мышечных волокон;
— II стадия — А-диски с повышенной анизотропией сближаются, вследствие чего толщина I-дисков уменьшается;
— III стадия — А-диски сливаются в сплошной анизотропный конгломерат.
Наряду с контрактурными повреждениями поляризационная микроскопия позволяет идентифицировать еще один тип поражения поперечно-полосатых мышечных волокон — гиперрелаксацию саркомеров, свойственную в большой мере ишемии миокарда (1).
Простота поляризационного метода позволяет с минимальными затратами резко повысить достоверность диагностики наличия инфаркта миокарда.
По поводу поляризационного микроскопа. Ситуация состоит в том, что практически из любого микроскопа можно сделать поляризационный. Используются два поляризационных фильтра (покупаемых в фотомагазине) — один помещается над осветителем, а второй помещается между препаратом и объективом.
Создан справочный CD-ROM «Поляризационная микроскопия». На диске собрано большое количество работ и материалов по применению поляризационной микроскопии.
Создан специализированный комплекс — Автоматизированное рабочее место судмедэксперта. В состав комплекса входят — микроскоп поляризационный Nikon E200, цифровая камера с 8 млн. элементов, адаптеры и программное обеспечение.
Литература
1. Кактурский Л. В. Поляризационная микроскопия // Микроскопическая техника. М.: Медицина, 1996.
2. Целлариус Ю. Г., Семенова Л. А. Применение поляризационной микроскопии для гистологической диагностики ранних стадий ишемических и метаболических повреждений миокарда // Cor et vasa. 1977. Vol. 19. N 1. P. 28 — 33.
3. Непомнящих Л. М. Морфогенез важнейших общепатологических процессов в сердце. Новосибирск: Наука, 1991. 352 с.
4. Целлариус Ю. Г., Семенова Л. А., Непомнящих Л. М. Очаговые повреждения и инфаркт миокарда. Световая, поляризационная и электронная микроскопия. Новосибирск, 1980.
